ретикулоциты что это такое у кошек
Всё, что вы хотели знать о ретикулоцитах, но боялись спросить
По мере того, как предшественники эритроцитов созревают в костном мозге, они отторгают свои ядра и избавляются от органелл (рибосом и митохондрий), участвующих в клеточном метаболизме и синтезе гемоглобина. Ретикулоциты – это незрелые эритроциты, еще содержащие в цитоплазме рибосомы, но уже лишенные ядер. По сравнению со зрелым эритроцитом они содержат на 20-30% меньше гемоглобина. В мазке, окрашенным стандартным красителем, они выглядят как более крупные и темные эритроциты, поэтому называются также полихроматофильными эритроцитами, или полихроматофилами (рис.1)
Рис.1. Картина регенераторной анемии. Стрелками отмечены ядросодержащие эритроциты; крупные голубые безъядерные клетки – ретикулоциты (полихроматофильные эритроциты).
После выхода из костного мозга ретикулоциты дозревают в периферической крови. Самые молодые ретикулоциты, появляющиеся в периферической крови, называются агрегированными (или агрегатными) ретикулоцитами. Они содержат крупные глыбки преципитированных рибосом (рис. 2).
Рис.2. 3 Агрегатных ретикулоцита (окраска на ретикулоциты)
По мере созревания агрегатные ретикулоциты постепенно превращаются в зернистые (или пунктатные). Зернистые ретикулоциты содержат мелкие точечные агрегаты рибосом (рис. 3).
Рис.3. Стрелкой отмечен зернистый ретикулоцит (окраска на ретикулоциты). Крупные синие точки в других эритроцитах – тельца Хайнца (но это уже совсем другая история).
У собак и кошек есть свои видовые особенности. Ретикулоциты собак созревают быстро (в течение 24 часов). Зернистые ретикулоциты собак являются коротко живущими и обычно не встречаются в значимых количествах. Поэтому при оценке регенераторного ответа у собак учитываются только агрегированные ретикулоциты.
У кошек агрегированные ретикулоциты примерно за 12 часов созревают до зернистых. Зернистые же ретикулоциты могут циркулировать 10-12 суток до своего превращения в эритроциты. Поэтому зернистые ретикулоциты у кошек встречаются в норме в значительных количествах (до 10% от всех эритроцитов); в мазках, окрашенных стандартным красителем, они неотличимы от обычных эритроцитов.
Повышенное количество агрегированных ретикулоцитов и у собак, и у кошек подтверждает недавний регенераторный ответ на анемию. При этом следует помнить, что для того, чтобы костный мозг ответил на анемию, необходимо 3-4 дня, а своего максимума регенераторный ответ достигает через 7 дней. Повышенное количество зернистых ретикулоцитов у кошек указывает на ответ костного мозга, произошедший 3-4 недели назад.
Для подсчёта ретикулоцитов используют как автоматический, так и ручной методы. Однако следует помнить, что гематологические анализаторы, способные подсчитывать ретикулоциты (ProCyte, LaserCyte), учитывают только число агрегированных ретикулоцитов. Подсчет зернистых ретикулоцитов возможен на данный момент только с помощью микроскопии.
Оценка регенераторного ответа
Для оценки регенераторного ответа основываются на проценте ретикулоцитов от общего числа эритроцитов, а также на абсолютном количестве ретикулоцитов в литре или микролитре. Интерпретация самого по себе процента ретикулоцитов (без оценки абсолютного количества) не рекомендуется, так как он не учитывает степени анемии у пациента и будет повышаться при снижении количества зрелых эритроцитов. Нормы обычно устанавливает лаборатория, проводящая данное исследование. Любое повышение числа ретикулоцитов сверх референсного интервала позволяет сделать вывод о регенеративном ответе на анемию. Отсутствие повышения говорит либо об отсутствии регенераторного ответа костного мозга (т.е. о нерегенеративном типе анемии), либо о кровопотере, случившейся 1-2 дня назад (в таком случае костный мозг еще не успел ответить и следует повторить исследование через 5-7 дней).
При подготовке статьи использованы материалы книги «Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям у собак и кошек» (Ш.Ваден и др.), а также материалы «Практического курса гематологии собак и кошек для ветеринарных врачей».
№AN150CAT, Ретикулоциты кошек, ручной подсчет
Срок исполнения
1 день (плюс 1-2 дня для регионов)
Исследуемый материал
Метод определения
микроскопия мазка (суправитальный метод окраски ретикулоцитов)
Определение количества ретикулоцитов используется при наличии анемии. Скорость высвобождения ретикулоцитов из костного мозга является лучшим показателем функции эритроидного компонента костного мозга.
Ретикулоциты – незрелые безъядерные эритроциты млекопитающих, которые содержат остаточные РНК и митохондрии, агрегированные в форме гранулярной сетчатой структуры (ретикулума) и выявляемые при использовании метода суправитального окрашивания метиленовым синим (окраска живых клеток). При созревании эритроцитов эта ретикулярная сеть исчезает. Высвобождение ретикулоцитов из костного мозга происходит в ответ на анемию. В зависимости от содержания остаточного количества рибосом и, соответственно, зрелости клеток выделяют два вида ретикулоцитов: агрегатные и зернистые (пунктатные). Агрегатные ретикулоциты циркулируют в крови в течение короткого промежутка времени (около 12 часов), прежде чем превратятся в зернистые (пунктатные) ретикулоциты, которые затем (через 10 дней) преобразовываются в зрелые эритроциты. Количество зернистых (пунктатных) и агрегатных ретикулоцитов возрастает с увеличением интенсивности эритропоэза. Поскольку зернистые ретикулоциты циркулируют в течение нескольких недель и сохраняются после того, как уровень агрегатных ретикулоцитов вернется в пределы референсных значений, их подсчет не имеет большого клинического значения при оценке текущего регенераторного ответа. Присутствие зернистых ретикулоцитов указывает на реакцию костного мозга на анемию, имевшую место примерно три недели назад.
При исследовании ретикулоцитов определяется процент ретикулоцитов путем пересчета на 1000 зрелых эритроцитов. При использовании этого показателя возможна некорректная оценка ответа костного мозга, потому как:
Скорректированный процент ретикулоцитов. При его расчете учитывается величина гематокрита. Вносимая корректировка актуальна только в случае, указанном в пункте 1, но не в случае, указанном в пункте 2. Скорректированный процент ретикулоцитов больше чем 1% у собак и 0,4% у кошек указывает на стимуляцию костного мозга в ответ на анемическое состояние. Скорректированный процент ретикулоцитов не был подтвержден для использования у других видов животных.
Абсолютное число ретикулоцитов. Этот параметр вносит коррективы в случае, описанном в пункте 1 (выше), но не корректирует эффект, описанный в пункте 2. Получение абсолютного числа ретикулоцитов больше чем 80 х 10ˆ9/л у собак и более 60 х10ˆ9/л у кошек указывает на регенеративный ответ (регенераторную анемию), и что причиной анемии являются внешние воздействия на костный мозг (т. е. кровотечение или гемолиз). В зависимости от снижения гематокрита или при очень низком гематокрите должно иметь место пропорционально более высокое абсолютное число ретикулоцитов.
Ретикулоцитарный индекс. Этот поправочный коэффициент используется для человека, но также был применен у собак и кошек для корректировки пунктов 1 и 2 (см. выше). Значимость этого параметра остается спорной, поскольку отсутствуют данные, подтверждающие успешное его использование у животных.
В крови здоровых собак может содержаться небольшое количество ретикулоцитов (до 1%). У собак все ретикулоциты агрегатные, т. е. они больше, чем зрелые эритроциты, и содержат большие глыбки агрегированных рибосом. Ретикулоцитоз у кошек менее выражен, чем у собак. У кошек выделяют две формы ретикулоцитов: зернистые (пунктатные) и агрегатные. Зернистые ретикулоциты более зрелые, чем агрегатные, и близки по размерам к созревшим эритроцитам. Они содержат от двух до шести мелких включений гранулярно-нитчатой субстанции остаточной РНК. У здоровых кошек может насчитываться до 10% зернистых (пунктатных) ретикулоцитов. После эпизода разрушения эритроцитов, возрастание числа зернистых (пунктатных) ретикулоцитов происходит через одну неделю, пик роста приходится на 2-3 неделю, затем их число постепенно снижается. Таким образом, увеличение зернистых (пунктатных) ретикулоцитов указывает на стимуляцию регенераторного ответа, произошедшую за 2-4 недели до этого, в то время как увеличение агрегатных ретикулоцитов указывает на недавнюю стимуляцию костного мозга. Увеличение числа агрегатных ретикулоцитов свидетельствует о текущей активности костного мозга в ответ на анемию (т. е. увеличение интенсивности эритропоэза или регенерации). Определение количества агрегатных ретикулоцитов является наиболее полезным при оценке реакции костного мозга при анемии, при этом зернистые (пунктатные) ретикулоциты обычно не подсчитываются (они считаются зрелыми клетками). Тем не менее, при легкой степени анемии подсчет пунктатных ретикулоцитов является полезным, поскольку обычно происходит сохранение агрегированных ретикулоцитов в костном мозге до их созревания в зернистые (пунктатные).
Отсутствие ретикулоцитов после развития анемии позволяет предположить отсутствие адекватной реакции костного мозга (нерегенеративную анемию). Это может наблюдаться при нехватке времени для развития ретикулоцитоза, недостаточности ретикулоцитарного ответа или нарушении эритропоэза.
Сроки исполнения: 1 день (плюс 1-2 дня для регионов).
Исследуемый аналит: цельная кровь.
Метод исследования: микроскопия мазка (суправитальный метод окраски ретикулоцитов ).
Подготовка пациента: перед проведением исследования животное должно быть выдержано на голодной диете минимум 12 часов.
Метод отбора биоматериала: венепункция.
Преаналитика: взятие крови — пробирка с розовой крышкой (с ЭДТА) 0,5 мл. Заполнить пробирку кровью СТРОГО до отметки на этикетке. Осторожно перевернуть пробирку 7-10 раз для перемешивания крови с антикоагулянтом. Стабильность пробы: 3 дня при +2°С…+8°С. Заполнить направительный бланк, указав код клиента. Температурный режим транспортировки в лабораторию +2°С …+8°С (синий пакет).
Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.
Любое повышение сверх референсного интервала позволяет сделать вывод о регенеративном ответе на анемию. Отсутствие повышения позволяет сделать вывод о наличии нерегенеративной анемии. У кошек в норме количество циркулирующих зернистых ретикулоцитов выше. Степень ретикулоцитоза должна всегда интепретироваться с учетом тяжести и длительности анемии.
Высокие значения при анемии (регенеративная анемия):
Низкие значения при анемии (нерегенеративная анемия):
Форма выдачи результата: количественный. Единицы измерения – клеток/ мкл.
Референсные значения: агрегатные ретикулоциты:
Ш.Ваден,Д.Нолл, Ф. Смит, Л.Тиллей. Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям собак и кошек.
Clinical pathology for the veterinary team / Andrew J. Rosenfeld, Sharon Dial.
г. Балаково, ул. Трнавская, д 4. тел. +7-987-356-69-05
Вы здесь
Анемия кошек и собак – диагностический подход
Введение
Анемии у животных подразделяются на два основных класса – регенеративная и нерегенеративная. Регенеративная анемия – снижение количества эритроцитов с наличием функциональной способности костного мозга к производству и высвобождению эритроцитов. Нерегенеративная анемия – снижение количества эритроцитов по причине или в сочетании со снижением способности костного мозга к производству и/или высвобождению эритроцитов. Ниже представлены основные причины анемий кошек и собак встречающихся на приеме в ветеринарной клинике.
Таблица. Характерные причины анемий кошек и собак.
Регенеративная анемия
Нерегенеративная анемия
Анемия кровопотери
Наружное и внутреннее кровотечение;
– травма (пр. высотная травма, ДТП, покус);
– кровоточащие опухоли (пр. гемангиосаркома селезенки);
– хирургическое кровотечение;
– кровотечение в ЖКТ;
– тяжелый эктопаразитизм (реже эндопаразитизм);
– нарушения гемостаза (пр. отравление антикоагулянтами, болезнь Вон Виллебранда, тромбоцитопения, ДВС).
Гемолитическая анемия
Иммунноопосредованная гемолитическая анемия
Болезнь холодовых агглютининов
Кровепаразиты (Mycoplasma haemofelis, Mycoplasma haemocanis, Babesia canis, Cytauxzoon felis)
Анемия с тельцами Хайнца и метгемоглобинемия
Токсичность цинка или меди
Гипофосфатемия
Наследственная гемолитическая анемия
Дефицит пируваткиназы и фосфорокиназы
Вторичная анемия
Анемия воспалительных заболеваний
Анемии хронического почечного и печеночного заболеваний
Гипотиреоз собак и гипоадренокортицизм
Железодефицитная анемия
Заболевания костного мозга
Нерегенеративная имммуно-опосредованная гемолитическая анемия
Истинная эритроцитарная аплазия
Миелодиспластический синдром
Конгенитальный дизэритропоэз
Апластическая анемия
Воспаление/некроз костного мозга
Миелофиброз
Лейкемия
Пролиферативные нарушение макрофагов.
Медикаментозные гематологические дискразии
Токсичность эстрогена, сульфадиазина, фенилбутазона и др.
Инфекции (эрлихиоз, ВЛК, ВИК, парвовирус собак и кошек)
Ниже представлен один из диагностических подходов после выявлении у кошек и собак, он следует из оценки тяжести анемии, подсчета количества ретикулоцитов, оценки морфологии мазка крови мозга и попытки морфологической классификации.
Оценка тяжести анемии
Таблица. Классификация анемий кошек и собак по степени тяжести, в зависимости от уровня гематокрита.
При определение тяжести анемии, интерпретация PCV и гематокрита должна проводится исходя из статуса гидратации животного, обычно это достигается при измерении общего белка плазмы на рефрактометре. Дегидратация (обезвоживание, гемоконцентрация) обычно сопровождается снижением объема плазмы и повышением уровня общего белка, что ложно повышает гематокрит животного (относительная полицитемия). Дегидратация может маскировать умеренные формы анемии, чаще это происходит на начальных этапах диагностики. Поэтому, статус гидратации животного должен быть нормализован в течении некоторого времени и только после этого может быть проведена оценка уровня эритроцитов (так, при кровотечении, данное время может занять до 1-2 дней). Гипергидратация напротив сопровождается повышением общего уровня плазмы и снижением общего белка, данный феномен обычно проявляется в ложном снижении уровня эритроцитов, что также требует определенной коррекции. Некоторые трудности отмечаются при гипопротеинемии на фоне кровотечения, заболеваниях кишечника, заболеваниях почечных клубочков и сходных патологиях сопровождающихся потерей белка.
У собак, определенную роль на уровень гематокрита может оказывать тонус селезенки, быстрое ее сокращение может вызывать некоторые изменения в распределении эритроцитов, потому как она содержит до 20%-30% массы красных кровяных телец. У кошек селезенка не принимает столь активного участия в циркуляции эритроцитов, и данный феномен отмечается редко. Выброс эритроцитов из селезенки развивается достаточно быстро, и в норме отмечается у здоровых животных. Меньшее значение на определение уровня эритроцитов оказывает расслабление селезенки с выведением эритроцитов из циркулирующего русла (пр. наркоз).
Существует некоторая разница по течению острой и хронической анемии, при медленном развитии снижения уровня эритроцитов у животного происходит физиологическая адаптация к гипоксемии и они могут в течение недель и месяцев жить с минимальными клиническими проявлениями (пр. гематокрит 5%-8% при хроническом развитии анемии).
При определении тяжести анемии, следует помнить о возрастных и породных отличиях уровня эритроцитов у животных, так у щенков в возрасте 2-х и 8-недельного возраста уровень гематокрита обычно соответствует 28%, у гончих гематокрит обычно имеет более высокие показатели по сравнению с общей популяцией собак.
Трудно оценить тяжесть анемии при метгемоглобинемии, когда общая масса гемоглобина животного находится в пределах нормы, но происходит значительное снижение его способности переносить кислород (пр. отравление угарным газом).
Умеренные по тяжести анемии обычно развиваются вторично к другим негематологическим проблемам (пр. анемия воспалительных заболеваний; неоплазия, почечная и печеночная недостаточность, эндокринные патологии), при этом, основные диагностические и терапевтические усилия должны быть направлены на поиск первичных патологий. Выраженные и тяжелые анемии часто указывают на первичное гематологическое заболевание и требуют активных диагностических и терапевтических действий.
Подсчет ретикулоцитов
Первичное суждение об эритропоэзе животного и состоянии функции костного мозга проводится по его способности производить ретикулоциты. При этом могут возникнуть некоторые трудности, и для более полной оценки используется анализ мазка крови и цитологическое исследование костного мозга.
Ретикулоциты – не зрелые эритроциты высвобождаемые в повышенном количестве из нормального костного мозга в ответ на снижение количества эритроцитов. Ретикулоциты содержат остаточные интрацитоплазматические органеллы (рибосомы, РНК) где продолжается синтез гемоглобина, при окраске новым метиленовым голубым (NMB) или бриллиантовым крезиловым голубым (BCB) при световой микроскопии определяются темно-голубые гранулы.
Ни один из современных автоматических анализаторов не способен точно определить количество пунктатных ретикулоцитов кошек, и при оценке регенеративного ответа следует полагаться исключительно на ручной подсчет. У них также возникают значительные трудности при идентификации типов ретикулоцитов. По паттерну ретикулоцитов кошек может быть предположено время развитии анемии, порядка 4 дней с момента начала развития анемии у кошек достигают пика агрегатные формы ретикулоцитов, затем их количество снижается и продолжается рост количества пунктатных ретикулоцитов. Полихроматофилы кошек с мазком окрашенным красителями Райта обычно отражает количество агрегатных ретикулоцитов.
Собаки также как и кошки, вначале высвобождают агрегатные ретикулоциты, которые очень быстро проходят через стадию пунктатных ретикулоцитов (до 24 часов) и созревают до зрелых эритроцитов. В результате быстрого созревания, ретикулоциты собак первичного состоят из агрегатных форм, они содержат значительные массы преципитированной РНК с незначительным количеством пунктутаных форм. Исходя из вышесказанного, ретикулоциты собак не подразделяются на две формы, ввиду малого количества пунктатных форм и отсутствия их клинического значения в диагностике анемии. Большинство лабораторий не подсчитывают эритроциты как ретикулоциты только с одной или двумя индивидуальными гранулами, а включают их в эритроциты с зернистыми артефактами или преципитатом. Ретикулоциты собак примерно равны полихмроматофилам наблюдаемым при окраске мазка красителями Райта, различные краски варьируют в способности проявлять полихроматофилы.
Таблица. Степень регенерации кошек и собак в зависимости от количества ретикулоцитов.
Ретикулоциты – норма количества в анализе крови
Общие сведения о ретикулоцитах в крови
В результатах анализов количество эритроцитов обозначают аббревиатурой RET. Для врача этот показатель является весьма важным. Референсные значения зависят от пола пациента и его возраста. Тест при необходимости может назначаться, начиная с первого дня жизни младенца.
RET является стандартным показателем анализа крови, но точное количество этих клеток подсчитывают только в исключительных случаях. Такое исследование проводится только по требованию врача при наличии у пациента определенных показаний. По результатам теста можно судить о работе почек, а также о функционировании костного мозга.
Количество эритроцитов в норме поддерживается на постоянном уровне. При нарушении синтеза эритроцитов или их чрезмерном разрушении развивается анемия. Также она может возникнуть при значительной кровопотере (эритроциты теряются вместе с кровью). В таких случаях организм стремится восполнить недостаток эритроцитов за счет образования новых. Результаты данного теста дают возможность определить тип анемии, оценить ее тяжесть и процесс образования RET в костном мозге.
Показания к анализу крови на ретикулоциты
Анализ крови на ретикулоциты может назначаться врачом в следующих случаях:
Подготовка к исследованию
Биоматериалом для данного анализа служит капиллярная или венозная кровь. В течение суток перед анализом нельзя употреблять алкоголь. Длительное голодание перед взятием крови не требуется. Достаточно не употреблять пищу в течение 2-3-х часов. В это время можно пить обычную воду. За полчаса до взятия биоматериала необходимо отказаться от курения, избегать стрессовых ситуаций, исключить физическое перенапряжение.
Норма ретикулоцитов в крови
Референсные значения отличаются для женщин и мужчин, а также меняются в зависимости от возраста. Отклонения от нормы могут указывать на различные патологические процессы. Для детей разных возрастных категорий установлены собственные нормы. У женщин старше 18-ти лет показатели должны находиться в пределах 0,59-2,07%, у мужчин – в диапазоне 0,67-1,92%.
Интерпретация результатов
Увеличение количества RET называют ретикулоцитозом. У взрослых он может свидетельствовать о значительном кровотечении в недавнем прошлом или продолжающейся кровопотере, анемии, гемолизе и других патологиях. Сниженные показатели указывают на то, что нормальный процесс формирования новых эритроцитов нарушен.
У детей нормальные показатели значительно отличаются, в зависимости от возраста. Для младенцев высокие показатели являются нормой, с возрастом они снижаются. В подростковом возрасте нормальные значения существенно отличаются, в зависимости от пола.
Выводы
RET – значимый показатель для врача. Для самодиагностики тест не предназначен, оценивать его результаты может только врач. При этом учитывается не только RET, а и большое количество дополнительных факторов (анамнез, результаты осмотра и прочее). Если показатели находятся в норме при наличии характерных жалоб, тест проводится повторно или назначается дополнительное обследование.
Гематология
Клинический анализ крови входит в список обязательного диагностического минимума. Анализ дает представление о количестве и качестве эритроцитов, содержании гемоглобина, показателе гематокрита, общем количестве лейкоцитов и тромбоцитов, лейкоцитарной формуле и скорости оседания эритроцитов. На исследование берут венозную кровь в пробирку с ЭДТА (наличие сгустков не допустимо).
2.1. Морфология эритроцитов.
Эритроциты
Это «красные кровяные клетки» — высокоспецифичные клетки крови животных и человека, содержащие гемоглобин. Эритроциты переносят кислород от легких к тканям и двуокись углерода от тканей к органам дыхания. Сухое вещество эритроцита содержит около 95% гемоглобина и 5% других веществ — белков и липидов. У млекопитающих эритроциты лишены ядра и имеют форму двояковогнутых дисков. Специфическая форма эритроцитов обусловливает более высокое отношение поверхности к объему, что увеличивает возможности газообмена. Средний диаметр эритроцитов приблизительно равен диаметру кровеносных капилляров. Эритроцит способен «складываться» при прохождении по капиллярам, просвет которых меньше диаметра эритроцита.
Изменение количества эритроцитов в периферической крови может носить, как физиологический, так и патологический характер.
Изменение размера и формы эритроцитов.
Морфология эритроцитов изменяется при многих гематологических заболеваниях и синдромах, что проявляется уменьшением размеров, изменением формы эритроцитов, интенсивности и характера их окрашивания, появлением патологических включений. О морфологии эритроцитов судят при исследовании окрашенных мазков крови с помощью иммерсионной системы микроскопа.
Анизоцитоз — это изменения эритроцитов по размеру. Анизоцитоз может быть физиологическим и патологическим.
Физиологический анизоцитоз — вариабельность диаметра эритроцитов у здорового животного.
Патологический анизоцитоз — изменение эритроцитов по размеру в условиях патологии. Выделяют микроцитоз, шизоцитоз, макроцитоз и мегалоцитоз.
Микроцитоз — преобладание в мазке крови эритроцитов малых размеров.
Макроцитоз — преобладание в мазках крови эритроцитов с размерами, превышающими норму.
Мегалоцитоз — наличие в мазках крови крупных гиперхромных эритроцитов, без просветления в центре, овальной формы.
Шизоцитоз — наличие мелких фрагментов эритроцитов, или дегенеративно измененных клеток неправильной формы.
Пойкилоцитоз — изменение формы эритроцитов разной степени выраженности, наблюдающееся практически при любых анемиях. К пойкилоцитам относятся: эхиноциты, акантоциты, стоматоциты, серповидные клетки, мишеневидные клетки, слезовидные клетки, микросфероциты, эллиптоциты.
Эхиноциты — сферические клетки, на поверхности которых располагаются спикулы.
Акантоциты — эритроциты, имеющие зубчатую форму. Имеют 3..12 спикул с булавовидными расширениями на концах. Длина и толщина спикул разнообразны. Объем, площадь поверхности, концентрация гемоглобина нормальны.
Стоматоциты — клетки с увеличенной на 20-30% объемом и площадью поверхности, имеют щелевидную форму центрального просвета.
Серповидные клетки — характерны для серповидно-клеточной анемии, а также других гемоглобинопатий, содержат гемоглобин S, который способен полимеризоваться и деформировать мембрану (особенно при дефиците кислорода в крови).
Мишеневидные клетки — имеют повышенное содержание холестерина, как следствие — увеличенную площадь поверхности. У них окрашенная периферия, и на фоне светлой центральной части небольшой более темный сферический участок.
Слезовидные клетки — имеют одну большую спикулу и часто содержат тельце Гейнца, являются микроцитами.
Микросфероциты — специфические клетки для наследственного микросфероцитоза. Выявление их на мазках требует большой тщательности.
Причины: Если популяция микросфероцитов разнородна, то это более характерно для гемолитической анемии.
Сфероцитоз можно рассматривать как терминальную, предгемолитическую стадию, в которую переходят эхиноциты, акантоциты, стоматоциты при необратимых повреждениях.
Эллиптоциты — составляют в норме менее 1% клеток. При разнообразных анемиях их концентрация увеличивается до 10 раз. При этом популяция овалоцитов неоднородна по размерам. Однородность популяции (более 25%) характерна для наследственного эллиптоцитоза.
Гемоглобин
– красный железосодержащий пигмент крови, выполняющий функцию переноса кислорода из органов дыхания к тканям и углекислого газа от тканей в органы дыхания. У позвоночных и некоторых беспозвоночных находится в красных кровяных клетках — эритроцитах. В общем анализе крови подсчитывается для расчета эритроцитарных параметров, по которым эритроциты делятся на гипо- и нормохромные.
Гематокрит — объёмная фракция эритроцитов в цельной крови (соотношение объёмов эритроцитов и плазмы). Величина гематокрита зависит от количества и объёма эритроцитов.
2.2. Эритроцитарные индексы
Средний объем эритроцита (MCV)— средний корпускулярный объем — средняя величина объема эритроцитов, измеряемая в фемтолитрах (fl) или кубических микрометрах. Средний объем эритроцита нельзя достоверно определить при наличии в исследуемой крови большого числа аномальных эритроцитов. Существует значительные межвидовые различия в значениях среднего объема эритроцитов. Увеличение MCV характеризуется как макроцитоз, уменьшение как микроцитоз. Этот показатель дает важную информацию для дифференциации различных видов анемии.
Средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах (MCHC) – Данный показатель используют для определения типа анемии. Вычисляют его по формуле: MCH = Hb/RBC (Hb – гемоглобин, RBC – количество эритроцитов). Высокие значения средней концентрации гемоглобина в эритроците являются артефактом. Причиной этого может быть гемолиз, хилез, присутствие телец Хейнца, агглютинация эритроцитов или неисправность анализатора.
Ширина распределения эритроцитов (RDW) – выражается в процентах и свидетельствует о том, насколько сильно эритроциты различаются между собой по размерам. Это соотношение больших и маленьких по размеру эритроцитов или показатель их гетерогенности.
Повышено:
Скорость оседания эритроцитов — скорость разделения крови с добавлением антикоагулянта на два слоя: верхний (прозрачная плазма) и нижний (осевшие эритроциты). СОЭ оценивается по высоте слоя плазмы в мм за 1 час.
2.3. Ретикулоциты
Ретикулоциты – молодые незрелые эритроциты, которые уже лишились ядра, но их цитоплазма содержит рибосомы и небольшое количество гемоглобина. Цитоплазма ранних ретикулоцитов содержит митохондрии и полирибосомы, необходимые для синтеза гемоглобина. Свое название ретикулоциты получили благодаря присутствию в цитоплазме сети, выявляемой при окрашивании мазков крови основными красителями. У собак, кошек и свиней созревание ретикулоцитов начинается в костном мозге и завершается в периферической крови и селезенке. У кошек при регенераторной анемии в крови обнаруживается ретикулоциты двух типов: агрегатные – более молодые у которых рибосомальная РНК осаждается крупных глыбок и пунктатные – более зрелые в виде отдельных мелких включений. У здоровых кошек, а также у кошек с регенераторной анемией число пунктатных или зернистых ретикулоцитов значительно больше, чем у животных других видов. Это связано с тем, что созревание ретикулоцитов, сопровождающееся утратой рибосом, у кошек протекает медленнее по сравнению с другими животными. В норме у здоровых кошек могут обнаруживаться в крови единичные пунктатные ретикулоциты. У кошек производится отдельно подсечет агрегатных и пунктатных ретикулоцитов, что дает дополнительную информацию о степени регенерации при анемии. В течение дня или быстрее циркулирующие в крови агрегатные ретикулоциты созревают в зернистые. Для созревания зернистых в крови кошек требуется неделя или больше. У собак и других животных из костного мозга высвобождаются относительно незрелые ретикулоциты агрегатного типа, поэтому в окрашенных обычным способом мазках крови они выглядят полихроматофильными и у них процент ретикулоцитов прямо коррелирует с процентом полихроматофильных эритроцитов, выявляемых при обычной окраске мазков крови.
Содержание ретикулоцитов выражают в виде процента от общего числа эритроцитов. Если известно общее число эритроцитов, можно определить абсолютное число ретикулоцитов (в расчете на микролитр). Для этого процент сосчитанных ретикулоцитов умножают на общее число эритроцитов. Изучая ретикулоцитоз, возникший после кровотечения, можно оценить динамику регенерации. Число агрегатных эритроцитов достигает максимума через 4 дня, поскольку необходимо время для их образования из клеток предшественников. У кошек наивысший подъем зернистых ретикулоцитов наступает позднее, их поступление из костного мозга в кровь продолжается после того как начинает повышаться гематокрит и прекращается выход в кровь агрегатных ретикулоцитов и у кошек с умеренной анемией число зернистых ретикулоциов может быть повышенным при незначительном содержании агрегатных.
При гемолитической анемии абсолютное число ретикулоцитов обычно выше, чем при кровотечении, это связано с тем, что концентрация железа в плазме в случае гемолитической анемии не снижена как при кровотечении.
2.4. Морфология лейкоцитов.
Лейкоцитарная формула — процентное соотношение различных видов лейкоцитов, определяемое при подсчёте их в окрашенном мазке крови под микроскопом.
Сдвиг лейкоцитарной формулы влево — увеличение количества незрелых (палочкоядерных) нейтрофилов в периферической крови, появление метамиелоцитов (юных), миелоцитов;
Сдвиг лейкоцитарной формулы вправо — уменьшение нормального количества палочкоядерных нейтрофилов и увеличение числа сегментоядерных нейтрофилов с гиперсегментированными ядрами (мегалобластная анемия, болезни почек и печени, состояние после переливания крови).
Значительное омоложение клеток — так называемый «бластный криз» — наличие только бластных клеток: острые лейкозы, метастазы злокачественных новообразований, обострение хронических лейкозов;
«Провал» лейкоцитарной формулы – бластные клетки, промиелоциты и зрелые клетки, промежуточных форм нет: характерно для дебюта острого лейкоза.
Палочкоядерные нейтрофилы — разновидность нейтрофилов. Имеют S-образное ядро (отсюда и название). С течением времени палочкоядерные нейтрофилы созревают и преобразуются в сегментоядерные нейтрофилы, под действием определенных стимулов дифференцировки. Палочкоядерные нейтрофилы являются лишь одним из заключительных этапов дифференцировки нейтрофильного гранулоцита в сегментоядерный нейтрофил.
Сегментоядерные нейтрофилы — разновидность нейтрофилов, дифференцированных из незрелого палочкоядерного нейтрофила путем сегментации ядра. Выполняют защитную функцию в отношении различных бактериальных и грибковых инфекций, а также поддерживают иммунную систему в норме.
Лимфоциты — клетки иммунной системы, представляющие собой разновидность лейкоцитов группы агранулоцитов, белых кровяных клеток. Главные клетки иммунной системы, обеспечивают гуморальный иммунитет (выработка антител), клеточный иммунитет (контактное взаимодействие с клетками-жертвами), а также регулируют деятельность клеток других типов.
Моноциты — крупный зрелый одноядерный лейкоцит группы агранулоцитов с эксцентрично расположенным полиморфным ядром и азурофильной зернистостью в цитоплазме. Моноцит — наиболее активный фагоцит периферической крови.
Может быть относительныи и абсолютным. Относительный моноцитоз встречается часто при заболеваниях, которые протекают с абсолютной нейтропенией и лейкопенией, и его диагностическое значение в таких случаях невелико.
Эозинофилы — клетки лейкоцитарного ряда, содержащие в цитоплазме округлые зернистые структуры, окрашиваемые кислыми красителями (в частности, эозином). Уровень содержания их в крови подвержен суточному ритму и регулируется системой гипофиз — кора надпочечников. Основные функции: защитная роль при аллергических реакциях, которая связана с высвобождением содержащегося в них ингибитора (его относят к простагландинам E1 и E2) гистамина, фагоцитарная активность.
Базофилы — подвид гранулоцитарных лейкоцитов. При окраске по Романовскому интенсивно поглощают основной краситель и не окрашиваются кислым эозином, в отличие и от эозинофилов, окрашиваемых только эозином, и от нейтрофилов, поглощающих оба красителя.
Базофилы крупнее нейтрофилов и эозинофилов. Гранулы содержат большое количество гистамина, серотонина, лейкотриенов, простагландинов и других медиаторов аллергии и воспаления. Принимают активное участие в развитии аллергических реакций немедленного типа (реакции анафилактического шока).
Изменения лейкоцитов.
Токсогенная зернистость.
Образование токсогенной зернистости происходит внутри клетки в результате физико-химических изменений белковой структуры цитоплазмы под влиянием продуктов интоксикации. Появляется раньше ядерного сдвига.
Вакуольная дистрофия.
При остром сепсисе, вызванном анаэробной инфекцией, с выраженным лейкоцитозом может наблюдаться вакуолизация почти всех лейкоцитов — «дырявые», «простреленные», лейкоциты.
2.5. Морфология тромбоцитов.
Тромбоциты
Один из видов форменных элементов крови, участвующий в процессе её свертывания.
В тромбоцитах выявляются специфические гранулы, содержащие серотонин и вещества, участвующие в свёртывании крови. У млекопитающих тромбоциты образуются в кроветворных органах из мегакариоцитов путём отделения участков их цитоплазмы.
2.6. Перекрестная проба для определения совместимости переливаемой крови.
Перекрестные пробы на совместимость показывают серологическую совместимость или несовместимсть между донором и реципиентом и выявляют присутствие или отсутствие аллоантител в плазме крови. Если в крови реципиента присутствуют антитела против антигенов, на поверхности эритроцитов доноров происходит гемагглютинация этих антител и гемолиз эритроцитов. Если в крови донора или реципиента изначально наблюдается гемолиз или агглютинация пробу на совместимость провести невозможно.
У собак, которым до этого никогда не делали переливания, кровь всегда будет совместимой, так как у этих животных естественным образом не возникают аллоантитела. Однако, если собаке уже раньше проводили переливание крови (не важно как давно), необходимо в обязательном порядке проводить тест на совместимость даже в том случае если используется тот же донор, что и в первый раз, поскольку совместимая группа крови не предотвращает сенсибилизацию пациента против клеток донора, так как не известны точные группы крови донора и реципиента. Промежуток времени между первоначальным переливанием и реакцией на несовместимость может длиться до 4 дней, а риск возникновения такой реакции сохраняется многие годы прошедшие после последнего переливания, при возможном наличии аллоантител.
У кошек первоначальный результат перекрестной пробы до проведения первого переливания может оказаться несовместимым из-за наличия естественным образом возникших аллоантител. Если известна группа крови донора, у кошек, исходя из результата перекрестной пробы, можно предположить группу крови реципиента, основываясь на степени несовместимости основной и второстепенной перекрестной пробы из-за сильного анти-А агглютинина. Развитие макроскопической агглютинации в течение одной минуты даже при проведении простой реакции на стекле между плазмой и эритроцитами показывает А-В несовместимость у кошек.
2.7. Дифференциальная диагностика анемии
Анемия – снижение количества эритроцитов и гемоглобина в крови. Это один из наиболее распространенных синдромов связанных с очень широким спектром заболеваний. Все анемии делятся на регенеративные и нерегенеративные. Регенеративные анемии характеризуются адекватным ответом костного мозга на потерю эритроцитов, который заключается в повышенной продукции и выделении в кровь новых клеток. Регенераторные анемии не связаны с нарушением работы костного мозга и возникают вследствие кровотечения или гемолиза.
При нерегенераторных анемиях костный мозг не может адекватно восполнять уменьшение количества эритроцитов. Для дифференциации регенераторной и нерегенераторной анемии исследуют такие эритроцитарные показатели как общее количество эритроцитов RBC, гемоглобин HB, гематокрит НСТ, средний объем эритроцита MCV, средняя концентрация гемоглобина в эритроците MCHC, ширина распределения эритроцитов по объему RDV, а так же данные биохимического анализа крови (белок, железо) и исследования окрашенного мазка крови.
Исходя из значений эритроцитарных показателей, различают 4 морфологические разновидности эритроцитов, которые лежат в основе классификации анемий:
Молодые незрелые эритроциты количество которых возрастает при регенераторной анемии и отражает величину эритропоэтической реакции костного мозга. Количество макроцитарно-гипохромных эритроцитов соответствует числу ретикулоцитов, особенно в максимальной точке их продукции т.е. через 4-5 дней после начала тяжелой формы анемии.
При рутинном исследовании мазков крови ретикулоциты определяются как полихроматофилы и их повышение называется полихромазия. У кошек с умеренной анемией в крови появляются только зернистые ретикулоциты, которые в отличие от агрегатных не содержат достаточного количества рибосом, чтобы придать цитоплазме синий цвет, поэтому полихромазия у них может не проявляться. Присутствие в мазках крови ядросодержащих эритроцитов – нормобластов так же может свидетельствовать в пользу регенераторной анемии, однако эти клетки могут также появляться в крови при расстройствах не анемического характера.
Ложная макроцитарно гипохромная анемия может наблюдаться у собак и кошек с персистирующей гипернатриемией.
Это регенераторная анемия с незначительным ретикулоцитозом. Возникает при:
Большинство эритроцитов имеют нормальные размеры и концентрацию гемоглобина. Такое состояние, когда уровень эритроцитов в крови снижен, а MCHC и MCV находятся в пределах нормальных значений, может свидетельствовать о недостаточном эритропоэзе в костном мозге и отсутствии ретикулоцитов. Наблюдается при нерегенеративной или пререгенеративной анемии. Пререгенеративная анемия бывает при слабой кровопотери или в первые 4-5часов после острой кровопотери или гемолизе эритроцитов, когда в крови еще не успели появиться молодые клетки. Нормоцитарная нормохромная анемия характерна также для следующих состояний:
Характеризуют железодефицитную анемию у собак и кошек. Однако в этом случае изменения MCHC и MCV проявляются только при значительном снижении запасов железа (месяцы у взрослых, недели у вскармливаемых животных), и изменении морфологии большого числа эритроцитов. Кроме этого у половины собак с хроническим дефицитом железа может иногда наблюдаться ретикулоцитоз, который смещает значение MCV в сторону увеличения.
В течение нескольких недель после рождения величина гематокрита и содержание гемоглобина быстро снижаются, а затем возрастают до уровня характерного для взрослых животных к 4-месячному возрасту. Такое понижение эритроцитарных показателей у новорожденных обусловлено всасыванием белков молозива и как следствие повышение объема плазмы за счет осмотического эффекта, сниженной продукции эритроцитов в раннем постнатальном периоде, укороченного времени жизни эритроцитов и быстрого роста животного.
2.8. Группы крови кошек
У кошек существует система групп крови АВ, которая включает три группы крови: группа А, группа В и группа АВ. Наследование групп крови у кошек уникально и имеет важное значение в селекционной работе в отношении неонатального изоэритролиза. Аллель А является доминантным над аллелем В и только у гомозиготных В\В на их эритроцитах появляется антиген группы В. Группа А проявляется у кошек либо гомозиготных А\А, либо гетерозиготных А\В. Редкая группа АВ наследуется отдельно как третий аллель, который является рецессивным по отношению к А и кодоминантным по отношению к В.
В отличие от собак, у кошек от природы имеются аллоантитела или изоантитела, направленные против антигена группы крови, которого им недостает. Так у всех кошек с группой крови В в возрасте несколько недель образуются очень сильные анти-А антитела с высоким гемолизином и титрами агглютинации. Эти анти-А антитела отвечают за реакции несовместимости, представляющие опасность для жизни, например неонатальный изоэритролизис и острые гемолитические реакции на переливание крови.
Несовместимое переливание крови группы А кошек с группой В приводит к очень тяжелой острой гемолитической реакции с признаками гипотонии, брадикардии, конвульсий.
Котята с группой крови А и АВ, получающие в первый день жизни анти А аллоантитела из молозива породистых кошек с крупой В подвергаются риску неонатального изоэритролиза. В отличие от кошек с группой крови В, кошки с группой крови А обычно имеют слабые анти-В аллоантитела с низкими титрами. Эти антитела сокращают срок жизни клеток переливаемой крови группы В кошкам с группой А с сравнительно слабыми признаками острой гемолитической анемии. Однако эти анти-В антитела не связаны с неонатальным изоэритролизом у котят с группой крови В, родившихся у породистых кошек с группой А.
Определение группы крови у кошек проводится для определения совместимости переливаемой крови для выбора подходящих партнеров при спаривании.
Следует проявлять осторожность при аутоагглютинации крови или ее очень низком показателе гематокрита. Рекомендуется проводить проверку крови на аутоагглютинцию с помощью физиологического раствора на предметном стекле. Постоянно присутствующая аутоагглютинация не дает установить группу крови.
У кошек основываясь на результатах перекрестных проб и знании группы крови донора, можно предположить группу реципиента. При сильной несовместимости главных перекрестных проб у кошки-реципиента, вероятно группа В, а у донора тип А или АВ – из-за сильного анти-А у реципиента. При сильной несовместимости второстепенной перекрестной пробы у реципиента, скорее всего, группа А или АВ, а у донора тип В – из-за сильного анти-А в крови донора. Поэтому, если нет возможности определить группу крови, нужно, по крайней мере, выполнить перекрестные пробы на совместимость.