Blautia coccoides что это повышены

Blautia coccoides что это повышены

Анализ и аналитическое описание Осипова Г.А.

По данным из научной литературы, воспалительные процессы внутренних половых органов составляют 62,5% в структуре гинекологической заболеваемости, причем у 9,5% женщин диагностируют гнойные воспалительные заболевания маточных труб и яичников.

Отмечается, что инфекционные заболевания редко вызываются одним возбудителем, и также возрастает роль условно-патогенных возбудителей. Смешанные инфекции составляют примерно 20-30% в структуре инфекционных заболеваний нижнего отдела половых путей, т.е. почти у каждой третьей пациентки выявляется инфекционный процесс, вызванный несколькими возбудителями. В таких случаях клинические проявления заболевания нетипичны и определяются характером взаимодействия между различными возбудителями, приводящим к угнетению или стимуляции одного вида микроорганизма другим. Гнойные воспалительные заболевания придатков матки относят к смешанным полимикробным инфекциям, важнейшими возбудителями которых, по данным Всемирной организации здравоохранения, являются анаэробно-аэробные микроорганизмы (42,5%), Neiseria gonorrhoeae (37,5%), Chlamydia trachomatis (27,5%), Mycoplasma hominis (до 15%) и др. В последние годы именно анаэробной инфекции уделяют особое внимание, поскольку она приобретает реальную значимость в клинической практике. При острых хронических воспалительных заболеваниях придатков матки и околоматочного пространства наиболее часто (82,5%) выделяют облигатные анаэробные микроорганизмы. По данным В.И. Удовиченко и соавт. (1997), 80% женщин из числа гинекологических больных, обращающихся в женскую консультацию с различными видами вульвовагинитов, цервицитов, уретритов, имеют смешанную бактериально-грибково-трихомонадную инфекцию.

Большинство патогенных организмов являются компонентами нормальной микрофлоры человека, этот факт подтверждает эндогенный путь трансмиссии инфекции. Подавляющее большинство воспалительных заболеваний органов малого таза обусловлено собственной условно-патогенной микрофлорой, ведущая роль в развитии которых принадлежит наиболее вирулентным анаэробам, энтеробактериям и коккам (Сидорова, 2007). В микрофлоре влагалища могут присутствовать гнилостные бактерии родов Bacillus, Proteus, Clostridium, Spirochaeta. По данным Wilkins M.et.al, 1984, количество анаэробов преобладает над аэробами в 10 раз в микробиоценозе вагины.

В свете этих данных представляет интерес изучение состава микробных сообществ матки и придатков, включающих в себя как нормальную, условно-патогенную, патогенную микрофлору. Изучение состава микрофлоры УГТ в норме и патологии в динамике может позволить оценить иммунологический, гормональный статус и гомеостаз макроорганизма. Знание микробных взаимоотношений помогают врачу определить истинную причину инфекционного процесса и подбирать адекватную терапию.

Участие в этом сообществе бактерий, относящихся к разным родам и группам, а также простейших делает затруднительным анализ состава этого сообщества традиционными методами, включающими микробиологический метод селективных сред с биохимическими тестами, и генетическими методами. Традиционные методы идентификации микроорганизмов не являются универсальными и требуют часто длительного времени исполнения.

На этом фоне выглядит перспективным выявление специфических веществ (маркеров) — структурных компонентов микроорганизмов — на фоне биологических жидкостях организма человека, и использование их состава для индикации микроорганизмов с помощью метода газовой хроматографии и масс-спектрометрии (ГХ-МС). Методом ГХ-МС с высокой точностью и чувствительностью определяется качественный и количественный состав микробиоценозов в экологии и медицине по жирным кислотам, оксикислотам, альдегидам и стеринам мембран клеток микроорганизмов и их профилям, относящимся к определенным видам сообщества. Метод детектирования микроорганизмов по ЖК-маркерам сродни генетическому (ПЦР, определение последовательности нуклеотидов 16sРНК, FISH и пр.), поскольку состав жирных кислот детерминирован в ДНК и воспроизводится путем репликации участка генома транспортными РНК и последующего синтеза ЖК по матричным РНК (Уотсон, Молек биол клетки, 5т). Поэтому профиль ЖК бактерий является их визитной карточкой или фингерпринтом как отпечатки пальцев людей (Митрука, 1978). Он так же консервативен, как строение ДНК, но и так же подвержен мутациям под действием факторов окружающей среды. Стабильность набора жирных кислот, составляющих клетки микробов, подтверждается исследованиями в области бактериальной палеонтологии, которые показывают, что до глубины времен в 2,5 млрд лет состав ЖК отдельных микробов и пула их жирных кислот в целом остается постоянным (Shekhovtsova, 2003).

Ранее описаны примеры обнаружения микроорганизмов при инфекционных процессах методом ГХ-МС, в том числе для анализа вагинальной микрофлоры [32] [Вестник РАМН, 1996, № 2]. В результате исследование состава жирных кислот вагинального содержимого показано, что его минорные компоненты относятся к микроорганизмам, колонизирующим половые органы в норме и патологии. Оценена их диагностическая значимость при микробной диагностике хронических вагинитов (Крымцева, 2003, Осипов, 2005).

В настоящей работе этот метод применен для исследования инфекционной составляющей патологического процесса эндометрия матки, приводящего к необходимости оперативного решения проблемы вынашивания плода. Целью исследования является выявление и определение в послеоперационном материале численности анаэробов и других, редко культивируемых микроорганизмов, наряду с традиционными объектами клинической микробиологии.

Методы

В основной группе больных исследованы 24 соскобов из полости матки от пациенток, перенесших операции по поводу проблем беременности.

Режим анализа подробно описан ранее (Осипов, 2010; Годков, 2011). Коротко, он состоит в следующем. Материал в количестве 0,04 г подвергали кислому метанолизу в 0,4 мл 1,2 М HCl в метаноле в течение 45 мин при 80°С. В результате реакции метанолиза жирные кислоты, входящие в состав сложных липидов пробы освобождаются в виде метиловых эфиров. Их экстрагировали в 400 мкл гексана, экстракт высушивали и обрабатывали в 20 мкл N,О-бис(триметилсилил)-трифторацетамида в течение 5 мин при 80 °С для получения триметилсилильных эфиров гидрокси-кислот и стеролов. Смесь эфиров в количестве 2 мкл вводили в инжектор ГХ-МС системы HP-5880/5975 Agillent Technologies (США) в модификации «Микробиологический анализатор «МАЭСТРО» ООО Интерлаб (Россия). Для управления и обработки данных использовали штатные программы прибора. Хроматографическое разделение пробы осуществляли на капиллярной колонке с метилсиликоновой привитой фазой HP-5ms Agillent Technologies. Длина колонки 25м, внутренний диаметр 0.25 мм. Режим анализа — программированый, скорость нагрева термостата колонки — 5 град/мин в диапазоне 130 — 320°С.

Площади пиков маркеров на масс-фрагментограммах интегрировали автоматически по заданной программе. Затем эти данные вводили в программу расчета, подготовленную в электронных таблицах EXCEL по технологии масс-спектрометрии микробных маркеров (МСММ, Разрешение Росздравнадзора ФС 2010/038 от 24.02.2010) (Осипов, 2010). Для количественного расчета использовали дейтерированную тридекановую кислоту в качестве внутреннего стандарта и собственный банк данных состава жирных кислот клинических изолятов микроорганизмов.

Ошибка количественных измерений численности микроорганизмов из-за погрешности в подготовке проб и анализа, несоответствия состава жирных кислот чистых культур банка данных и изучаемого сообщества in situ может составлять 20%.

Метод характеризуется следующими показателями:

Результаты

Результаты измерения концентраций микробных маркеров в соскобах матки с последующей реконструкцией микробного сообщества позволили определить состав микст-инфекции в очаге поражения (табл 1).

Таблица 1

Результаты анализа состава локальной микст-инфекции в соскобах из полости матки (N=24). Данные в размерности [клеток/мл х10 5 ]

Из 54 таксонов микроорганизмов, контролируемых в процессе анализа, в итоговую таблицу выведены 48, из которых 38 показывают избыточный рост (инфекцию), Клинически значимыми считали более чем двойное превышение нормы на основании статистического распределения концентрации маркеров микроорганизмов у больных и здоровых людей (Белобородова, 1999). Такие изменения отмечены в таблице затенением клетки. Как видно, инфицирование каждого исследованного материала включает несколько (до двадцати двух, Пожарская, GBT-1559) таксонов микроорганизмов. Это подтверждает тезис литературного обзора о смешанном характере инфекции половых органов женщин. Данные таблицы 1 подтверждают также сформировавшееся представление о доминировании анаэробов. Их доля составляет 70-90% по нашим измерениям и соответствует оценке других авторов. В отличие от предыдущих работ наши измерения носят количественный характер, что позволяет выявить микробные доминанты воспалительного процесса на одной и той же пробе инфицированного материала, а также сопоставлять данные анализов разных пациентов. В данном случае доминантами у большинства пациентов оказались бактерии видов Propionibacterium/Cl. subterminale, представителей родов Eubacterium, Clostridium, Lactobacillus, Ruminococcus. Такой тип инфекции показан на рис 1, где в графическом выражении лучше иллюстрируется количественные изменения относительно нормы и других составляющих микробного сообщества. За неимением возможности оценить уровень колонизации слизистых оболочек полости матки и придатков у здоровых женщин, мы приняли в качестве максимально возможного уровня данные нормы по крови. Тем более, что проба носит явно насыщенный кровяной характер.

По кратности превышения нормы выделяются бактерии кишечной группы (рис 1), для которой наблюдается многократное увеличение концентрации маркеров клостридий группы Clostridium ramosum, групп Eubacterium/Cl. сoccoides, Propionibacterium/Cl. subterminale в соскобе из полости матки по сравнению с их уровнем в крови в норме. Пересчетное значение численности этих микроорганизмов по технологии МСММ достигает уровня 10 9 – 10 10 клеток\мл. Расчетная численность C. ramosum в десяти случаях превышает норму в десять-двадцать раз. Из трудно культивируемых микроорганизмов, которые позволяет выявить масс-спектрометрический метод, следует отметить еще анаэробы Streptococcus mutans, численность которых в 11 пробах более 5 раз выше нормальной. В большинстве случав в составе микст-инфекции присутствуют анаэробные актинобактерии Actinomyces viscosus.

Таблица 2

Число случаев более чем двукратного превышения расчетной численности микроорганизмов соскобах из полости матки по сравнению с нормой крови

Здесь под C. ramosum подразумевается целая группа клостридий, объединенная общим маркером – специфической ненасыщенной жирной кислотой ω9-гексадеценовой. Это C. inocuum, C. clostridieforme, C. subterminale, C. sordellii, C. septicum, C. paraputrificum, C. celatum, C. cochlearium, C. limosum, C. fallax, C. difficile. Другая группа Clostridium 12:0group имеет общий маркер – додекановую кислоту и (С12:0) и включает виды Clostridium perfringens, С. putrefacience, C. hystolyticum, C. tetani. Свои маркеры имеют клостридии других видов: C. histolyticum, C. coccoides вместе с большой группой родственных эубактерий (род Eubacterium), а также C. propionicum, C. perfringens и C. subterminale вместе с частью видов Propionibacterium. В сумме клостридии составляют около 74% микробного сообщества, то есть, как принято в хирургии, это анаэробная клостридиальная инфекция (АКИ).

По данным реконструкции микробного сообщества эндометрия по маркерам в соскобе из полости матки численность ряда микроорганизмов многократно превышает таковую в крови той же пациентки (Рис 2). Основываясь на данных предыдущих исследований методом МСММ (Лазебник, 2008; Прохорова, 2012) мы полагаем, что имеет место транслокация микроорганизмов кишечника по крови и/или восходящая инфекция из вагины с последующим размножением уже в самом органе – матке.

Рис.2. Сравнение состава реконструкции микробного сообщества в соскобе матки и крови одной и той же пациентки методом МСММ.

Таким образом, применение метода масс-спектрометрии микробных маркеров позволило дополнить картину инфицирования верхних половых органов женщин таксонами, которые оказались доминирующими в микробном сообществе, а также расширить список участников инфекционного процесса. Ими оказались, как и предполагалось другими исследователями, представители кишечной микробиоты. Кроме того, в отличие от предыдущих исследований, мы дали их количественную оценку, показав рейтинговый ряд агентов инфекции и подтвердив доминирование анаэробов родов Propionibacterium, Eubacterium, Clostridium и Bifidobacterium. Вряд ли следует сразу зачислять в патогенны доминантные микроорганизмы кишечной микробиоты: бифидобактерии, лактобациллы,эубактерии и пропионобактерии. Также оставим за скобками клостридии группы C. ramosum, поскольку их роль в организме явно выглядит двоякой. Пока не будем осложнять задачу их транслокацией в полость матки. Попробуем выделить явных патогенов.

Для этого исключим из таблицы перечисленные выше кишечные доминантные бактерии и микробы, которые в норме, и оставим те, что превышают норму, а также те, что часто встречаются в бакпосеве – для возможного сопоставления.

Тогда для соскоба GBT-1559 получим следующую сокращенную таблицу (рис 3):

Рис. 3. Наиболее вероятные агенты инфекции эндометрия, за исключением микробов, доминирующих в микробиоте кишечника.

Это реальные кандидаты в агенты инфекции, которая препятствуют нормальному протеканию беременности.

Если посмотреть в таком ключе остальные анализы соскобов, то будет видно, что везде такими агентами являются обязательно Clostridium perfringens, H. pylori, одна или несколько актинобактерий родов Streptomyces, Nocardia, Pseudonocardia. В примере на рисунке 3 это Actinomyces viscosus, Nocardia asteroids и Rodococcus. В этой группе известные разрушители клеток животных. Они обнаружили себя в амбулаторной практике в качестве агентов, препятствующих оплодотворению и развитию яйцеклетки в плод, в том числе при экстракорпоральном оплодотворении.

Тем не менее, нельзя исключать участие в патогенезе и «хороших» бактерий: лактобацилл, бифидобактерий, пропионобактерий и части клостридий. Можно найти десятки документированных случаев участия в инфекционном процессе любого микроба, обитающего в теле человека. В том числе лактобацилл и бифидобактерий. Особенно лактобациллл. Действительно, по литературным данным они зафиксированы как возбудители при эндокардите, бактериемии, бактериурии, перитонитах, абсцессах и менингитах. Наиболее часто выявляются L. casei и L. rhamnosus (Cannon, 2005). Eubacterium – родственные клостридиям микроорганизмы, являющиеся одними из основных обитателей кишечника. Условные патогены с развитой системой видов и штаммов с универсальными свойствами. Эубактерии участвуют в качестве основных агентов во многих воспалительных процессах и синдромах: воспаления неизвестной этиологии, себорея, атопический дерматит, кахексия, воспаление кишечника, глютеновая энтеропатия, воспаление десен, средиземноморская семейная лихорадка, Yang Xiao-xia’s “mysteriuos disease”, синдром раздраженного кишечника, воспаление легких, бактеремия, хронический синусит, болезнь Крона, периодонтит, артрит, простатит, муковисцидоз, эндометрит, эндокардит, неспецифический вагинит, врожденный порок сердца и другие. Основными функции эубактерий в организме человека являются: образование водорода, высвобождение гистамина, биотрансформация желчных кислот, индуцирование продукции провоспалительных цитокинов и TNF-alfa, а также противовоспалительного цитокина IL-10 (как ЛПС или клеточные токсины Грам+ патогенов) и другие. Патогенность клостридий более известна в клинической практике. Они обладают широким набором экзотоксинов. У C.perfringens их насчитывается двенадцать. С. ramosum обладает близкой активностью, в том числе также может вызывать газовую гангрену, язвенный и некротизирующий колиты. Они известны как агенты септицемии, нефропатии, бактериемии и менингита (Brook, 1995; в Атласе, 2003).

Литература

В этом можно усматривать специфику инфицирования внутренних половых органов, так как при вагинитах в слизистой влагалища их рост хотя и происходит, но не в такой степени. Для вагины более характерна инфекция Clostridium perfringens. При воспалениях, напоминающих по клиническим проявлениям кандидоз, их численность до 30 крат превышают уровень колонизации слизистой оболочки в норме.

Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия, Том 3, N 1, 2001

стр. 39-47

Экологические аспекты чувствительности к антибиотикам анаэробных бактерий

Источник

Влияние антибактериальной терапии на желудочно-кишечный тракт у детей

В настоящее время уделяется всё больше внимания проблеме изменения микробиоты кишечника, особенно у детей, под влиянием различных факторов окружающей среды. Среди них прием антибактериальных препаратов – наиболее очевидный практический случай.

Микробиота желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) оказывает большое влияние на здоровье растущего детского организма, особенно в раннем возрасте. Становление и развитие кишечной микробиоты начинается с момента рождения ребенка и продолжается в течение первых лет жизни. На формирование микробиоты ЖКТ оказывают влияние различные факторы, ведущим из которых является характер родов (вагинальные, кесарево сечение), а также особенности вскармливания младенца (рис. 1).

Причины заболевания

Известно, что антибактериальная терапия оказывает негативное влияние на функционирование ЖКТ как у детей, так и взрослых. При этом среди современных антибактериальных средств весьма сложно найти препараты, которые не обладали бы негативным действием на пищеварительный тракт. Помимо желудочной диспепсии, проявляющейся тошнотой и рвотой, у пациентов, принимающих антибиотики, чаще всего развивается диарея. Согласно данным литературы, частота развития нежелательных явлений при приеме азитромицина составляет около 9%, хотя для отдельных нозологий может достигать 20% (например, при уретрите) [3, 4]. В большинстве случаев при приеме азитромицина регистрируются умеренно выраженные реакции со стороны ЖКТ (боли в животе, тошнота, рвота, диарея, которые, как правило, не требуют отмены препарата). Антибактериальная терапия у детей раннего возраста способствует увеличению представителей энтеробактерий и энтерококков, что сохраняется и через месяц после окончания терапии [5]. Прием антибиотиков во время беременности или в период кормления ребенка грудью также влияет на микробное разнообразие у младенца [6]. Madan J.C. с соавт. (2012) показали возможность возникновения сепсиса у новорожденных при снижении филогенетического разнообразия кишечной микрофлоры [7]. Например, 5-дневный курс антибиотика при приеме внутрь изменяет состав микробиоты кишечника человека на срок до 4 недель, затем происходит восстановление баланса микрофлоры и возврат к исходной ассоциации, характерной для данного эпитопа, однако некоторые бактериальные ассоциации кишечника не восстанавливаются при сроке наблюдения до 6 месяцев [8].

В последние годы большой интерес для исследователей представляет не только поражение ЖКТ с развитием антибиотико-ассоциированной диареи, но и связь изменений микробиоты кишечника с возникновением таких заболеваний, как сахарный диабет, ожирение, аллергия и др. [9, 10]. Установлено, что повторные курсы антибиотиков у младенцев приводят к уменьшению количества Bifidobacteria и Bacteroides в кишечнике. Именно с изменениями содержания этих представителей кишечной микробиоты связывают риск развития ожирения. После курса лечения антибиотиками происходит медленное восстановление популяции бифидобактерий, в то время как представители фила Bacteroides spp. обычно не восстанавливаются в полном объеме [11].

Материалы и методы исследования

Нашей кафедрой было проведено открытое сравнительное исследование у детей с риносинуситами по эффективности и безопасности препарата Экомед (порошок для приготовления суспензии, содержащий азитромицин 100 мг/ 5 мл производства ОАО «АВВА РУС», Россия в сочетании с лактулозой) в сравнении с обычным азитромицином без лактулозы. В исследование были включены 100 пациентов (50 мальчиков и 50 девочек) в возрасте от 3 до 14 лет, которые были разделены на 2 группы:

Критериями включения в исследование явились:

В ходе исследования предполагалось 4 визита:

Таблица 1. Характеристика пациентов, включенных в исследование

Сравнительная характеристика детей, включенных в исследование, представлена в таблице.

Функциональное состояние ЖКТ оценивалось перед (1 визит) и после приема антибактериальной терапии (2 визит) и при динамическом наблюдении (через 2 недели и через 2 месяца после окончания антибактериальной терапии (3 и 4 визиты) по бальной системе по следующим критериям: абдоминальный синдром, метеоризм, вздутие живота, нарушение характера стула и симптомы диспепсии. Для оценки степени выраженности данных нарушений распределение проведено по бальной системе, где 0 – отсутствие симптома, 1 – слабо выражен симптом, 2 – умеренно выражен и 3 – сильно выражен.

Консистенция стула оценивалась по следующим критериям: 0 – жидкий, 1 – кашицеобразный, 2 – полуоформленный, 3 – оформленный. Для оценки частоты опорожнения кишечника использовали следующую градацию: 0 – до 3 раз, 1 – больше 4 раз в день, 2 – больше 5 раз в день, 3 – больше 7 раз в день.

По оценке функциональных нарушений ЖКТ у пациентов до приема антибактериальной терапии статистически значимые различия не были отмечены между группами по критериям абдоминальная боль (р = 0,157), вздутие живота (р = 1,0), метеоризм (р = 1,0) и консистенция стула (р = 0,458). Таким образом, на момент включения в исследования статистически значимых отличий между двумя исследуемыми группами не наблюдалось.

Мы оценили выраженность и частоту возникновения функциональных нарушений желудочно-кишечного тракта после проведенного курса антибактериальной терапии в группах (рис. 2).

После курса антибактериальной терапии при оценке функциональных нарушений ЖКТ статистически достоверная разница между группами обнаружена по показателям метеоризм у 42% детей в группе азитромицин против 14,3% детей в группе Экомед (p = 0,002), консистенция стула (p = 1,016Е-06), частота стула более 3 раз в день зарегистрирована у 28% детей группы азитромицин против 0% детей группы Экомед (р = 0,000042).

На третьем визите (примерно через 14 ± 3 дней после окончания терапии) статистически значимые отличия наблюдались только по консистенции стула – отклонения у 38% против 16,3% (p = 0,007).

В основной группе пациентов через 2 месяца после окончания курса антибактериальной терапии слабо выраженная абдоминальная боль беспокоила 3 детей (6%), вздутие живота – 9 пациентов (18%) и метеоризм – 4 детей (8%). Нарушение характера стула в виде жидкого зарегистрировано только у 1 ребенка (2%), полуоформленного у 3 детей (6%) и кашицеобразный у 2 детей (4%). Нужно отметить, что учащение стула не отмечено ни у одного ребенка в основной группе за весь период наблюдения.

В контрольной группе пациентов на 4 визите слабо выраженная абдоминальная боль сохранялась у 4 детей (8%), вздутие живота – у 5 пациентов (10%) и метеоризм – у 8 детей (16%). Умеренно выраженное вздутие живота отмечалось у 2 детей (4%) и метеоризм – у одного пациента. Жалобы на жидкий стул предъявлял лишь один ребенок, кашицеобразный стул – 2 ребенка (4%) и полуоформленный стул сохранялся у 9 детей (18%) в контрольной группе (рис. 2, 3, 4). Таким образом, через 2 месяца после окончания антибактериальной терапии статистически значимых отличий между группами по исследуемым показателям найти не удалось.

При анализе изменений между визитами в группах обнаружено, что:

Источник